Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展加速的过程中逐渐扩展

从第一次注意到胰岛自身特异性到注意到1HG心血管疾病诊断症状的重大突破率在幼儿时期就有很好的叙述，多个胰岛自身特异性无症状的幼儿中的有70%在血清变换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的幼儿这一比重上升到84%。远比之下，占诊断1HG心血管疾病一半以上的HG1HG心血管疾病的发病组态还无法得到充分的数据比对。

愈来愈多的人开始可用分期系统来定义1HG心血管疾病的重大突破：有机体在注意到多种胰岛自身特异性时离开第1期中的，注意到血糖异常时离开第2期中的，注意到症状时离开第3期中的。一些多发胰岛自身特异性无症状的有机体，在1期和2期，重大突破较慢，并发展为发病的1HG心血管疾病。我们之前叙述了一小组在首次检测到多种胰岛自身特异性结果显示后至多于10年无心血管疾病的极慢重大突破者，这小组病患人口数多于，但特征颇为明确。随后，我们发现胰岛自身甲基化甲基化CD8+T细胞会反应在重大突破较快的病患中的基本不长期存在，但在最近发病和依然长期存在的心血管疾病病患中的很容易检测到。这可能表明，与重大突破病患远比，这些病患自身免疫反应的抑制增强。

早期数据结果表明，尽管抑制性T细胞会(Treg)量但会，但心血管疾病病患长期存在一些功用弱点，其中的包括对IL-2的反应能够降低。此外，心血管疾病病患中的的不稳定性CD4+T细胞会可能对抑制兼具抵抗性，表现为不稳定性T细胞会的抑止弱化，其本质转化成的Treg和排泄转化成的抑制Treg，以及甲基化历程的CD4+T细胞会中的IL-2反应弱化。本数据比对的旨在是叙述了CD4+抑制性T细胞会(Treg)在一小群极较快重大突破者中的的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX数据比对是一项以人群进一步将的主干数据比对，在21岁以下确诊的病患亲属中的检查1HG心血管疾病的危险因素。我们之前叙述了依然较快重大突破者的特征，他们保持多重胰岛自身特异性无症状超过10年，但无法注意到心血管疾病的诊断症状，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名之后保持无心血管疾病并情愿提供大量血液结果显示的较快重大突破者纳入T和B细胞会功用比对。在目前的数据比对中的，8名慢重大突破者(SP小组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的胰岛自身特异性无症状。所有的与会者都西北面1HG心血管疾病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了胰岛自身特异性对某些甲基化的无症状反应，然而，一名病患之前西北面2期至多于6年，但无法注意到诊断症状，一名病患被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集科学研究结果显示时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中的对该NAD顺利进行了基本上评量。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，转用多参数流式细胞会妖术和T细胞会抑止试验评量NAD中的Treg的Hz、表现HG和功用。可用FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和复单单)顺利进行无监督聚类比对，评量Treg表现HG。

结果：与肥胖NAD远比，来自慢重大突破体的遗忘CD4+T细胞会的监督聚类说明了，诱导的遗忘CD4+ TregHz上升，与糖皮质激素抑制的TNFR特别蛋白(GITR)表述上升有关。一名HbA1c上升的病患与重大突破较快者和匹配的对照小组远比，Treg谱有所不同。功用结果表明，与肥胖NAD远比，来自较快重大突破体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞会抑止明显受到破坏。表现为对不稳定性CD4+T细胞会CD25和CD134表述的抑止上升。

上图1 熟悉的表现HG比对说明了，CD4+Treg亚HG在慢重大突破函数调用中的上升。由FlowSOM转化的Treg室，组织起来在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示单单物表述核对单单10个元簇:遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)可用9个不同Treg标示单单转化的10个元簇的MST。每个节点代表者一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在节点小组四周上色。每个节点中的的饼上图指单单单个标示单单的表述级别。(b)每个元聚类的热上图，以说明了既有标示单单表述。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转化上图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较丰度为每个metacluster箱终点站上图(丰度> 0.05%)未确定为HD和SP小组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞会(l)。绿色左上方代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 可用CITRUS的预测模HG证实，TregHz的上升是重大突破较快的徽标。标准相关联(a - f)和果树比对(g-k)尤其SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表者性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利进行分离，仿真FlowSOM群体。(b) HD(横纹)和SP(蓝点)小组以及NADSP 606(绿色)中的CD25+ cd127的Hz简介上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联子集的箱终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述风力着色，箭头突单单的簇被辨别为SP和HD函数调用两者之间的不同。(j)箱终点站上图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组中的，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比较丰度(比重)。(k)控制点说明了每个簇的表现HG(红色)和Treg标示单单比较表述与或多或多于表述(深蓝色);上列，内核Treg_3;下面四人，内核Treg_4。或多或多于与所有其他簇中的标示单单的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

上图3 与肥胖献血者远比，重大突破较快者遗忘treg的GITR上升。每个遗忘CD4+T细胞会元簇(遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表述标示单单的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表述热上图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中的所有HD(白色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR表述联接，说明了控制点(c)和简介上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NAD包括，p< 0.05(深蓝色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表述，从标准相关联，从所有HD(白色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)联接，说明了控制点(e)和简介上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

上图4 来自较快重大突破的CD4+ treg细胞会控制不稳定性CD4+T细胞会的能够降低。SP小组用深蓝色的终点站和左上方指单单，HD小组用紫色的终点站和左上方指单单，绿色的终点站/左上方指单单NADsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示单单为CFSE, Treg按掩蔽的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，养成3过后顺利进行流式细胞会妖术检测。(a-d)与CD4+需要的话者比较应的treg养成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者养成。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。可用无症状对照(诱导的作单单反应细胞会则有treg)数值抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

上图5 不稳定性CD4+T细胞会对较快重大突破的T细胞会再造的抑止更敏感。SP小组用深蓝色的终点站和左上方指单单，HD小组用紫色的终点站和左上方指单单，绿色的终点站/左上方指单单NADsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示单单，treg按掩蔽的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，养成3过后顺利进行流式细胞会妖术(CD25反染)和细胞会因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同养成。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE抑止%-(b)。(c,d) CD25抑止%-(c)和CD134抑止%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在养成单单来中的的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

事实：我们得单单的事实是，来自较快重大突破子的再造遗忘CD4+Treg在GITR表述中的得到了扩展和丰富，强调了进一步数据比对Treg在1HG心血管疾病风险有机体中的的异质性的必要性。

原文引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28